Methyl Red Test per scoprire la capacità di un batterio di utilizzare il glucosio (con figura)
Leggi questo articolo per conoscere il test del metile rosso (test MR), per scoprire la capacità di un batterio di utilizzare il glucosio con la produzione di un acido stabile come prodotto finale!
Principio:
Alcuni batteri hanno la capacità di utilizzare il glucosio e convertirlo in acido stabile come acido lattico, acido acetico o acido formico come prodotto finale.
Questi batteri inizialmente metabolizzano il glucosio in acido piruvico, che viene ulteriormente metabolizzato attraverso la 'via di acido misto per produrre l'acido stabile.
Il tipo di acido prodotto differisce da specie a specie e dipende dalle specifiche vie enzimatiche presenti nei batteri. L'acido così prodotto diminuisce il pH a 4, 5 o inferiore, che è indicato da un cambiamento nel colore del rosso metile dal giallo al rosso.
Nel test metil red (test MR), i batteri test vengono coltivati in un mezzo di brodo contenente glucosio. Se i batteri hanno la capacità di utilizzare il glucosio con produzione di un acido stabile, il colore del rosso metile cambia da giallo a rosso, quando aggiunto alla coltura di brodo.
Materiali richiesti:
Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo MR-VP (methyl red-Voges Proskauer brodo o brodo di glucosio fosfato), soluzione di metile rosso, colonie isolate o culture pure di batteri.
Procedura:
1. Gli ingredienti del mezzo di brodo MR-VP (contenente il glucosio come componente principale) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitando e vorticoso. Il brodo MR-VP viene anche chiamato brodo glucosfosfato (Figura 7.4).
2. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 6, 9 usando HCI 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.
3. Il brodo viene distribuito in cinque provette (circa 10 ml ciascuna), con tappo di cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o nastro di gomma.
4. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.
5. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.
6. I batteri test vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.
7. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 24-48 ore in un incubatore.
8. La soluzione alcolica di rosso metile (3-4 gocce) viene rilasciata in ciascuna provetta.
osservazioni:
1. Colore rosso prodotto: MR positivo (cioè il batterio ha convertito il glucosio in un acido stabile, come indicato dalla conversione del rosso metile dal giallo al rosso. Indica la fermentazione dell'acido misto).
2. Colore rosso non prodotto: MR negativo (cioè il glucosio nel mezzo non è stato convertito in un acido stabile.Questo indica la fermentazione del glicole butilenico).
