Principio di funzionamento del microscopio a fluorescenza (con figura)

Leggi questo articolo per conoscere il funzionamento del microscopio a fluorescenza!

Principio di funzionamento:

Molte sostanze assorbono la luce. Tuttavia alcuni di loro, dopo aver assorbito la luce di una particolare lunghezza d'onda e di energia, emettono luce con una lunghezza d'onda più lunga e una minore energia.

Tali sostanze sono chiamate "sostanze fluorescenti".

L'applicazione di questo fenomeno è alla base del microscopio a fluorescenza. In pratica, i microbi sono colorati con una tintura fluorescente e poi illuminati con luce blu. Il colorante assorbe la luce blu (lunghezza d'onda più corta) ed emette luce verde (lunghezza d'onda maggiore).

In un microscopio a fluorescenza, come sorgente luminosa viene utilizzata una lampada ad arco al mercurio ad alta intensità (Figura 4.11). Emette luce bianca, che passa attraverso un "filtro dell'eccitatore". Consente solo la componente blu della luce bianca (la luce bianca è composta da sette colori, che nell'ordine decrescente di lunghezza d'onda sono viola, indaco, blu, verde, giallo, arancione e rosso) per passare attraverso di essa e blocca tutti gli altri componenti di colore.

Uno specchio dicroico, che riflette la luce blu, ma consente di utilizzare la luce verde sul percorso della luce blu. Lo specchio è fissato ad un angolo tale che la luce blu viene riflessa verso il basso sul campione.

Il campione è stato precedentemente colorato con un colorante fluorescente, come acridina arancione NO, acridina gialla, acriflavina, tioflavina S, tioflavina T o titano giallo G. Alcune parti del campione trattengono il colorante, mentre altre no. Le porzioni, che trattengono la tintura fluorescente, assorbono la luce blu ed emettono luce verde. La luce verde emessa sale verso l'alto e passa attraverso lo specchio dicroico. Riflette la luce blu posteriore, se presente, e lascia passare solo la luce verde.

Quindi, la luce raggiunge un "filtro barriera". Consente alla luce verde di passare all'occhio e blocca la luce blu residua dal campione, che potrebbe non essere stata completamente riflessa dallo specchio dicroico.

Pertanto, l'occhio percepisce le parti colorate del campione come un oggetto verde incandescente su uno sfondo nero come il jet, mentre le parti non colorate del campione rimangono invisibili.