Immunofluorescenza utilizzata per il rilevamento di antigeni nelle cellule
Immunofluorescenza utilizzata per il rilevamento di antigeni nelle cellule!
Coon (1941) introdusse composti fluorescenti come immunochimici per rilevare antigeni nei tessuti.
L'immunofluorescenza viene utilizzata per il rilevamento di antigeni in cellule o tessuti (utilizzando anticorpi noti) e per la rilevazione di anticorpi nel siero (utilizzando antigeni noti). La fluorescenza è l'emissione di luce di un colore quando la sostanza è esposta ad una luce di un altro colore. Quando una sostanza fluorescente viene eccitata con una luce di lunghezza d'onda particolare, assorbe la luce ed emette una luce di un'altra lunghezza d'onda.
io. L'isotiocianato di fluoresceina (FITC) ha un assorbimento massimo di luce a 490-495 nm e emette luce a 530 nm (colore verde).
ii. L'isotiocianato di tetrametil-rodamina ha un potere assorbente massimo di luce a 550 nm ed emette luce di colore rosso (580 nm).
un. Immunofluorescenza diretta:
Questa tecnica viene utilizzata per rilevare antigeni in cellule o tessuti.
Il tessuto, che ha un antigene sconosciuto, è fissato su un vetrino.
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L'antisiero noto (specifico per l'antigene di interesse) coniugato con FIT (noto come coniugato) viene stratificato sul tessuto e incubato.
io. Se l'antigene di interesse è nei tessuti, il coniugato si lega all'antigene.
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Quindi il vetrino viene lavato per rimuovere il coniugato non legato.
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La diapositiva viene quindi visualizzata al microscopio a fluorescenza.
io. Si vedrà un colore verde brillante se c'è dell'antigene nel tessuto.
ii. Se non c'è antigene nel tessuto, tutto il coniugato sarebbe stato lavato durante la fase di lavaggio e, di conseguenza, non c'è colore verde.
Questa tecnica viene anche utilizzata per rilevare la presenza di antigeni batterici o virali nei tessuti infetti.
b. Immunofluorescenza indiretta:
Questa tecnica viene utilizzata per rilevare gli anticorpi nel siero.
Le cellule contenenti antigeni noti sono fissate su vetrino.
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Il siero del test viene aggiunto al vetrino e incubato.
io. Se ci sono anticorpi (contro gli antigeni delle cellule) nel siero, gli anticorpi si legheranno agli antigeni delle cellule.
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Quindi il vetrino viene lavato per rimuovere i componenti del siero non legati.
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L'immunoglobulina antiumana coniugata con FITC viene aggiunta e incubata.
io. L'immunoglobulina anti-umana coniugata con FITC si lega agli anticorpi sierici legati agli antigeni cellulari.
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Dopo il lavaggio, il vetrino viene visualizzato sotto il microscopio a fluorescenza.
io. La presenza di un colore verde brillante indica che il siero ha anticorpi contro gli antigeni nelle cellule.
ii. L'assenza di colore verde indica l'assenza di anticorpi sierici contro gli antigeni nelle cellule utilizzate.
