Come eseguire la colorazione della capsula di un batterio

Obiettivo per eseguire la colorazione delle capsule dei batteri, per osservare la capsula batterica.

Scopo:

In alcuni batteri, la parete cellulare è circondata da un involucro di cellule viscose chiamato "capsula". È fatto di polisaccaride, glicoproteina o polipeptide.

Quando la capsula è troppo sottile per essere osservata al microscopio ottico, viene chiamata "microcapsula" e quando è così spessa che molte cellule sono incorporate nella matrice capsulare; è chiamato "melma".

In base alla presenza o all'assenza di capsula, i batteri sono di due tipi come segue:

(1) Batteri capsulati:

Un batterio che possiede una capsula è un batterio capsulato.

(2) Batteri non capsulati:

Un batterio, che non possiede una capsula, è un batterio non capsulato

Lo scopo della colorazione della capsula è osservare la capsula batterica distinguendo il materiale capsulare dalla cellula batterica.

Principio:

Nella colorazione della capsula, una macchia di batteri viene fatta al centro di una diapositiva. Non viene fissato a caldo, in quanto il restringimento delle celle causato dal riscaldamento può creare una zona chiara intorno alla cellula, che può essere confusa con una capsula.

Inoltre, poiché il materiale capsulare è solubile in acqua e può essere lavato via con un lavaggio vigoroso, nella colorazione vengono utilizzati solo due reagenti senza lavaggio dell'acqua intermedio. Uno dei due reagenti è la macchia primaria, il cristallo viola. Conferisce un colore viola-blu scuro a entrambi, la cellula e la capsula.

Tuttavia, viene "assorbito" nella cellula a causa della natura ionica dei componenti cellulari, mentre semplicemente "aderisce" alla capsula, a causa della natura non ionica del materiale capsulare. Per evitare di spostare il materiale capsulare, lo striscio non viene lavato con acqua.

Il secondo reagente, solfato di rame agisce sia come agente decolorante che come controcolore. Decolora rimuovendo l'eccesso di cristalli viola dalle cellule e il cristallo viola che aderisce alla capsula. Contrasta anche la capsula e conferisce un colore blu chiaro ad essa. La capsula ora appare azzurra, mentre la cellula appare blu-viola intenso.

Materiali richiesti:

Diapositiva, loop, olio per immersione, microscopio, colorazione crystal violet, soluzione di solfato di rame (20%).

Procedura:

1. Il vetrino viene pulito correttamente sotto l'acqua del rubinetto, in modo che l'acqua non rimanga come gocce sulla sua superficie (Figura 5.14).

2. L'acqua aderente viene eliminata con carta bibula e il vetrino viene asciugato all'aria.

3. Uno striscio di batteri viene preparato al centro della diapositiva in due modi come segue.

(un) Se si osservano batteri cresciuti su piastra di agar o inclinazione dell'agar, una goccia d'acqua viene posta al centro del vetrino e un anello di batteri dalla piastra o dall'inclinazione viene trasferito su di esso da un ciclo sterilizzato su fiamma. Quindi, mediante una lenta rotazione del cappio nella goccia, viene fatta una sospensione batterica che viene dispersa fino a ottenere uno striscio.

(B) Se si osservano batteri cresciuti in un brodo liquido, una goccia della sospensione dei batteri viene posizionata direttamente al centro del vetrino da un cappio sterilizzato dalla fiamma e si fa uno striscio diffondendosi.

4. La macchia è asciugata all'aria. Non viene effettuata alcuna fissazione del calore poiché il restringimento delle cellule risultante può creare una zona limpida attorno ai batteri, che può essere confusa con una capsula.

5. Lo striscio viene inondato con la macchia primaria, viola di cristallo, per 5-7 minuti.

6. Lo striscio viene lavato con una soluzione al 20% di solfato di rame. Per evitare di spostare il materiale capsulare, lo striscio non viene lavato con acqua.

7. Il vetrino viene asciugato con carta bibula.

8. La diapositiva viene agganciata allo stadio del microscopio e lo striscio viene osservato in caso di obiettivi a bassa potenza e alto secco.

9. Una goccia di olio per immersione viene messa sullo striscio.

10. Lo striscio si osserva sotto l'obiettivo di immersione dell'olio.

osservazioni:

1. Colore dell'area che circonda le celle:

Blu chiaro: capsula presente (batteri capsulati)

Viola-blu scuro: capsula assente (batteri non capsulati)

2. Colore delle celle:

Scuro viola-blu

3. Se capsulato, dimensione delle capsule:

Piccolo, moderato o grande.

4. Dimensione relativa di cellule e capsule:

Con la stima dell'occhio, fai il disegno del campo sotto l'obiettivo di immersione dell'olio, indicando la dimensione relativa delle cellule e delle capsule.