Usi clinici del citometro a flusso
Usi clinici del citometro a flusso!
1. Enumerazione di celle diverse (come celle T e celle B).
2. Rilevazione degli antigeni delle cellule B e classificazione della neoplasia ematopoietica (leucemie e linfomi).
3. Rilevazione di antigeni sulla superficie delle cellule mieloidi, utile nella diagnosi delle sindromi mielodisplastiche e della leucemia mieloide.
4. Le molecole CD34 sono espresse sulla superficie delle cellule progenitrici staminali ematopoietiche. Le cellule staminali isolate dal midollo osseo o dal sangue periferico vengono enumerate usando mAbs marcati su CD34, in modo che il numero esatto di cellule staminali possa essere calcolato e trasfuso su un paziente. Le restanti cellule staminali sono conservate in azoto liquido e possono essere trasfuse successivamente allo stesso paziente, se necessario.
5. Fenotipizzazione HLA Gli anticorpi HLA marcati con cromo fluorescente vengono utilizzati per legare con antigeni MHC di classe I e classe II sulla superficie delle cellule. Le cellule colorate vengono successivamente analizzate (come le cellule passano come un'unica colonna) nel citometro a flusso.
6. Rilevazione di antigeni intracellulari
Le cellule vengono prima trattate con agenti che rendono la cellula permeabile, senza rompere completamente la cellula.
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Successivamente, le cellule vengono trattate con conservanti delicati per collegare trasversalmente le proteine citoplasmatiche e impedire loro di fuoriuscire dalla cellula.
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Quindi le cellule vengono trattate con mAbs etichettati diretti contro antigeni intracellulari. Gli mAbs etichettati entrano nelle cellule e si legano agli antigeni intracellulari.
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Le cellule vengono passate attraverso il citometro a flusso per valutare le cellule colorate.
io. Rilevazione della transossilucleotide transferasi terminale intracellulare (TdT) aiuta a definire le prime neoplasie delle cellule B. TdT è un enzima espresso durante il riarrangiamento del gene dell'immunoglobulina che è responsabile dell'aggiunta di nucleotidi casuali nelle giunzioni dei segmenti di immunoglobulina. Quindi, l'espressione di TdT in una popolazione di cellule B maligne indica un fenotipo di cellule B molto immaturo.
ii. La rilevazione della mieloperossidasi intracellulare aiuta nella classificazione di vari sottotipi di leucemia mieloide.
7. Analisi del contenuto di DNA delle cellule. Il citometro a flusso può valutare la quantità di materiale genetico in una cellula e determinare la frazione in fase S o la quantità di aneuploidia in una popolazione di cellule, a. Ploidia del DNA Le cellule normali che contengono due copie del cromosoma sono chiamate cellule diploidi.
Tutte le cellule (eccetto l'ovulo e lo sperma) che non sono diploidi sono considerate aneuploidi e possono fungere da indicatore affidabile di neoplasie. Un gran numero di cellule in un tumore ha una quantità aberrante di DNA. L'analisi del DNA citometrico a flusso viene eseguita mediante incubazione di cellule permeabilizzate con coloranti fluorescenti (come ioduro di propidio).
La tintura si intercala in DNA e fluorescenti. La quantità di fluorescenza è direttamente proporzionale al contenuto di DNA della cellula. L'efficacia della chemioterapia per la malignità in un paziente può essere valutata mediante analisi ploidia. L'analisi della ploidia determina la quantità totale di DNA nucleare nelle singole cellule tumorali. L'indice del DNA è il rapporto tra la fluorescenza del DNA delle cellule tumorali e la fluorescenza del DNA delle cellule normali. L'indice del DNA delle cellule diploidi normali è 1. L'indice del DNA di più o meno di 1 indica un tumore aneuploide.
b. Analisi del ciclo cellulare del DNA:
Il contenuto di DNA delle cellule in varie fasi del ciclo cellulare durante la replicazione (cioè fase di sintesi del DNA pre-fase Gq / Gj, sintesi di fase S-DNA, fase di sintesi fase-post-DNA G2 / M) può essere misurato per valutare la crescita cellulare e aggressività del cancro. Più DNA è sintetizzato da cellule tumorali aggressive. Le cellule che attraversano la fase S mostrano una sintesi del DNA direttamente proporzionale alla loro aggressività.
8. Molti test funzionali dei leucociti possono essere eseguiti con citometro a flusso.
io. Produzione di O 2 - (superossido) come test per la malattia granulomatosa cronica.
9. Rilevazione della vitalità cellulare:
Lo ioduro di propidio colorante entra in cellule con membrane rotte e una struttura nucleare disgregata. Pertanto, con ioduro di propidio, le cellule morte si fluoresceranno mentre le cellule viventi non fluorescenti. Inoltre, la fluorescenza dello ioduro di propidio si trova nella parte più rossa dello spettro. Pertanto, questo metodo può essere combinato con una normale colorazione mAb, in cui le cellule morte sono colorate in rosso e quindi possono essere omesse dall'analisi dei dati.
10. Sono anche disponibili metodi citometrici a flusso per rilevare le cellule sottoposte all'apoptosi.
