2 Tipi di metodi di elettroforesi delle proteine del siero (con figura)

Il siero ha un numero di proteine. Nel 1937, Arne W Tiselius introdusse il metodo di separazione delle diverse proteine in un campo elettrico.

Nell'elettroforesi, le proteine sono separate in un campo elettrico. Successivamente, è stata sviluppata l'elettroforesi a zone in carta o acetato di cellulosa. Nel 1952 fu sviluppato un metodo a due stadi che combinava l'elettroforesi con l'immunodiffusione. Successivamente, C Williams, P Graber e M Poulik hanno introdotto il metodo classico di Immunoelettroforesi (in cui sia l'elettroforesi che la doppia immunodiffusione vengono eseguite sullo stesso vetrino rivestito di agar).

1. Elettroforesi a zone:

Le proteine possono essere separate sulla base delle loro cariche elettriche di superficie. Per la separazione viene utilizzato un mezzo di supporto inerte come carta, acetato di cellulosa o agar. Il campione di siero è posto sul mezzo di supporto. Il mezzo di supporto è quindi collegato ai poli positivo e negativo dell'apparato di elettroforesi. Sotto il campo elettrico, le proteine si caricano e si muovono attraverso il mezzo di supporto. Il loro movimento dipende dalla loro carica elettrica.

Poiché diverse molecole proteiche hanno cariche diverse, si spostano in posizioni diverse nel mezzo di supporto. Solitamente l'elettroforesi viene eseguita per 60-120 minuti o più. Quindi le proteine vengono colorate e esaminate visivamente o scansionate in un densitometro. La scansione del densitometro delle frazioni proteiche separate e colorate converte ogni banda in un pattern nel suo picco caratteristico e aiuta nella quantificazione di ciascuna frazione di proteina.

2. Elettroforesi delle proteine del siero:

Il siero umano normale è separato in cinque principali bande elettroforetiche: albumina, α ₁ -globulina, α ₂ -globulina, β-globulina e y-globulina (Fig. 27.5).

L'elettroforesi a zone è utile nella diagnosi di alcune malattie umane:

Figure da 27.5 A a C:

Elettroforesi su striscia di acetato di cellulosa e scansione densitometrica della striscia di carta acetato di cellulosa: A e A1: Bande di proteina sierica normale su striscia di acetato cellulare visualizzata dopo colorazione (A) e scansione densitometrica da striscia di acetato di cellulosa (A1).

B e B1: ipergammaglobulinemia

C e C1: ipogammaglobulinemia

io. Mieloma multiplo e macro-globulinemia di Waldenstrom. In queste malattie, un picco proteico elettroforeticamente limitato si verifica di solito nella regione della γ-globulina. Il picco rappresenta un accumulo di una immunoglobulina monoclonale. Le immunoglobuline monoclonali hanno una carica superficiale definita, e quindi viene prodotto un picco (mentre il modello normale di immunoglobuline policlonali produce uno striscio nella regione della y-globulina).

ii. Ipogammaglobulinemia (marcata diminuzione della gamma globulina del siero).

iii. Ipoproteinemia (marcata riduzione di tutte le proteine del siero).

iv. ipoalbuminemia:

Riduzione dell'albumina, che si verifica in molte malattie del fegato e dei reni.

v. L'elettroforesi dell'urina aiuta nella rilevazione di catene leggere libere di immunoglobuline, come la proteina di Bence-Jones.

VI. L'elettroforesi di zona del liquido cerebrospinale (CSF) aiuta nella diagnosi della sclerosi multipla e di altri disturbi del sistema nervoso centrale. L'elettroforesi delle proteine del siero è considerata un test di screening per la rilevazione di anomalie delle proteine. Sono necessarie ulteriori analisi per trovare le anomalie specifiche.