Rilevanza clinica del test di Coomb (test antiglobulinico)

Il test di Coombs è una tecnica semplice e geniale. Il test di Coombs fu descritto per la prima volta nel 1908 da Moreschi e fu poi riscoperto da RR Coombs e collaboratori nel 1945 per dimostrare gli anticorpi non agglutinanti agli antigeni dei globuli rossi.

(Gli anticorpi sono chiamati anticorpi "non agglutinanti" perché gli anticorpi non possono causare agglutinazione, nonostante il loro legame con gli antigeni sui globuli rossi.Anche gli anticorpi sono talvolta indicati come "anticorpi incompleti" poiché gli anticorpi non causano agglutinazione, ma non c'è incompletezza nella struttura della molecola anticorpale).

Gli anticorpi non agglutinanti, infatti, si legano agli antigeni sulla superficie dei globuli rossi. Ma non si verifica l'attesa agglutinazione dei globuli rossi. Quando viene aggiunto un altro anticorpo (chiamato anti-anticorpo o antiglobulina) contro l'anticorpo legato a RBC, si verifica l'agglutinazione. Gli antiantibodies si legano alle regioni Fc degli anticorpi legati a RBC e formano un reticolo, che porta all'agglutinazione. Il test è chiamato test antiglobulinico o test di Coombs.

Esistono due tipi di test anti-globulin:

1. Test anti-globulina diretto (DAT)

2. Test anti-globulina indiretto (LAT)

1. Il test diretto anti-globulina (DAT) viene utilizzato per rilevare l'anticorpo, che è legato ai globuli rossi in vivo.

I globuli rossi lavati da un paziente vengono miscelati con anti-globulina.

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Le anti-globuline si legano agli anticorpi non agglutinanti sulla superficie dei globuli rossi e causano l'agglutinazione visibile. Il risultato del test è DAT positivo (Fig. 16.6).

Pertanto un DAT positivo suggerisce che i globuli rossi del paziente siano rivestiti con anticorpi non agglutinanti e che il paziente sia DAT positivo.

io. DAT positivo si verifica con globuli rossi del neonato con malattia emolitica del neonato (i globuli rossi dell'HDN sono rivestiti con anticorpi anti-Rh).

ii. Attualmente, il DAT viene utilizzato per rilevare gli anticorpi IgG e C3b legati alla superficie dei globuli rossi. Nei pazienti che presentano emolisi, il test DAT è utile per determinare se l'emolisi è di eziologia immune o meno.

Fig. 16.6: test di agglutinazione diretta di Coomb (DAT).

Il DAT viene utilizzato per rilevare la presenza di anticorpi non agglutinanti legati sulla superficie dei globuli rossi. A. I globuli rossi lavati dell'individuo sono miscelati con il reagente anti-globulina. Le anti-globuline si legano alle regioni Fc degli anticorpi legati al RBC e causano l'agglutinazione visibile, e l'individuo si dice che sia DAT positivo. B. Se i globuli rossi non sono rivestiti con anticorpi, non si verificherà agglutinazione e l'individuo sarà DAT negativo. La DAT viene utilizzata anche per rilevare la presenza di globuli rossi con anticorpo anti-Rh di neonati sospettati di soffrire di malattia emolitica del neonato

io. Cause non immuni dell'emolisi [come disseminazione della coagulazione intravascolare, carenza di enzimi eritrocitari [come il deficit di glucosio-6-fosfato deidrogenasi (deficit di G6PD), difetti della membrana dei globuli rossi (come sferocitosi ereditaria, EPN) e emoglobinopatie (come anemia falciforme, talassemia)] sono DAT negativi.

ii. Le cause immunitarie dell'emolisi (come l'anemia emolitica autoimmune, l'emolisi indotta da farmaci, le reazioni trasfusionali emolitiche) sono DAT positive.

iii. Un DAT positivo dovuto al solo C3 è presente in pazienti con autoanticorpi freddi, emoglobinurea fredda parossistica e in alcuni casi di anemia emolitica indotta da farmaci.

2. Il test di agglutinazione indiretta (IAT) viene utilizzato per rilevare la presenza di anticorpi non legati contro i globuli rossi nel siero di un paziente.

io. IAT per rilevare gli anticorpi anti-Rh nel siero della madre:

Il siero della madre è incubato con globuli bianchi Rh positivo O. Se nel siero della madre sono presenti anticorpi anti-Rh, gli anticorpi si legheranno ai globuli rossi. I globuli rossi vengono quindi lavati.

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Quindi viene aggiunto il reagente anti-globulina.

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Se nel siero della madre sono presenti anticorpi anti-Rh, i globuli rossi vengono agglutinati e il test è positivo per l'IAT.

ii. IAT per rilevare gli anticorpi nel siero di un ricevente contro i globuli rossi donatori durante la trasfusione di sangue:

Il test IAT è ampiamente utilizzato (prima della trasfusione di sangue) nella corrispondenza incrociata dei globuli rossi del donatore con il siero del ricevente per rilevare la presenza di anticorpi nel ricevente, che possono reagire con i globuli rossi del donatore.

Lavare i globuli rossi del donatore.

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Aggiungere il siero del ricevente agli eritrociti e incubare a 37 ° C per 30 minuti.

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Lavare i globuli rossi.

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Aggiungere il reagente anti-globulina.

Lo sviluppo di agglutinazione indica che il siero del ricevente ha anticorpi contro i globuli rossi donatori e il test è segnalato come positivo per gli anticorpi. Un risultato IAT positivo indica che il sangue donatore proposto non deve essere trasfuso al ricevente in questione.

Gli attuali reagenti test anti-globulina (chiamati anche reagenti di Coombs) contengono un "cocktail" di anticorpi monoclonali diretti contro le IgG umane e C3b (il legame degli anticorpi non agglutinanti ai globuli rossi attiva il sistema del complemento determinando la deposizione di frammenti di C3b sul Globuli rossi e quindi a parte gli anticorpi, i globuli rossi sono rivestiti anche con frammenti di C3b).