Test dell'umidità sui batteri per scoprire la loro capacità di idrolizzare l'urea (con figura)

Test dell'umidità sui batteri per scoprire la loro capacità di idrolizzare l'urea (con la figura)!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di idrolizzare (degradazione in presenza di acqua) l'urea in NH ₃ e CO ₂, poiché possono produrre l'enzima "ureasi".

NH ₃ è alcalino (di base), grazie al quale aumenta il pH cambiando il colore del rosso fenolo dal giallo al rosa.

Nel test dell'ureasi, i batteri test sono cresciuti su slant agar contenenti urea e rosso fenolo. Se i batteri hanno la capacità di idrolizzare l'urea, il colore del mezzo cambia da giallo a rosa. Alcuni batteri possono produrre NH ₃ abbattendo i peptoni nel mezzo. In questi casi si ottiene un risultato falso positivo.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ago da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, apparato di filtrazione a membrana, agar urea, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Cinque provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico (Figura 7.15).

2. Gli ingredienti del terreno di agar urea (contenente l'urea come componente principale) o la sua polvere (eccetto l'urea) necessaria per 100 ml del terreno vengono pesati e sciolti in 90 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml mediante tremante e vorticoso.

3. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 6, 9 usando HCI 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

4. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

5. Il matraccio è tappato in cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o elastico.

6. Le cinque provette e la beuta contenente urea (eccetto l'urea) vengono sterilizzate a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e lasciati raffreddare per qualche tempo senza consentire al terreno di solidificarsi. Il raffreddamento del mezzo impedisce la formazione di condensa e l'accumulo di gocce d'acqua sulle inclinazioni. Se il terreno è già stato preparato e solidificato durante lo stoccaggio, deve essere liquefatto riscaldando accuratamente finché non si scioglie completamente.

8. La soluzione di urea al 20% viene preparata sciogliendo 20 grammi di urea in 100 ml di acqua distillata ed è sterilizzata mediante un apparecchio di filtrazione a membrana, poiché l'urea non può essere sterilizzata dal calore, poiché si decompone dopo il riscaldamento.

9. 10 ml della soluzione di urea sterilizzata vengono mescolati asetticamente accuratamente con 90 ml del mezzo liquefatto raffreddato sterilizzato (liquefatto mediante riscaldamento).

10. Prima che si solidifichi, il terreno, in condizioni di fuso caldo, viene distribuito in modo asettico nelle 5 provette sterilizzate con tappo di cotone (circa 20 ml ciascuna).

11. Le provette sono mantenute in una posizione obliqua per raffreddare e solidificare il terreno, in modo da ottenere delle inclinazioni di agar urea.

12. I batteri da testare vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, negli slant, penetrando nel calcio e strisciando sulla superficie degli slant con l'aiuto di un ago sterilizzato a fiamma. L'ago viene sterilizzato dopo ogni inoculazione.

13. Gli slant inoculati vengono incubati a 37 ° C per 24 ore in un incubatore.